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英文簡稱
規(guī)格
貨號
4T1:4T1
1×106
P-X1026
產(chǎn)品詳情：
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）
生長培養(yǎng)基:
RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來源文獻(xiàn))
背景描述 4T1細(xì)胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細(xì)胞株。當(dāng)4T1細(xì)胞注射到BALB/c小鼠中時(shí)，4T1細(xì)胞會(huì)自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺、肝、結(jié)和大腦，同時(shí)在注射部位形成始發(fā)灶，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時(shí)不需要摘除始發(fā)灶。4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動(dòng)物模型。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動(dòng)力學(xué)相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比，由于4T1細(xì)胞的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)(少到僅僅1個(gè))也可以在許多遠(yuǎn)端器官中檢測到，沒必要數(shù)結(jié)或稱重器官。
組織來源 乳腺組織
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 乳腺癌細(xì)胞
生物等級 BSL-1
致瘤性 Yes, forms tumors and metastasizes in BALB/c mice.
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-2539
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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球蛋白超家族成員3抗體 |
耳蝸蛋白OTOS抗體 |
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IGSF3 |
細(xì)胞粘合素(固生蛋白)抗體 Anti-Tenascin C/Tn-C |
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過氧化氫異構(gòu)酶ALOXE3抗體 |
CACNB4 |
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ALOXE3 |
L型電壓依賴型鈣通道β4抗體 |
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P73腫瘤抑制基因抗體 Anti-P73 protein |
OTOS |
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蛋白酶體PSMβ7抗體 Anti-Proteasome 20S beta 7 |
HSV2 |
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細(xì)胞分化蛋白SEP1抗體 Anti-SEPT1 |
DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體 |
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單純皰疹病毒2抗體 |
E.coli DH-5 Alpha |
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大鼠L-乳酸脫氫酶(L-LDH) elisa分析檢測試劑盒 |
鋅指蛋白342抗體 Anti-ZNF342/ZNF296 |
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L-LDH ELISA Kit |
神經(jīng)細(xì)胞粘附蛋白NGN抗體 Anti-NGN/Neogenin |
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人谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶pi基因(GSTpi)elisa分析檢測試劑盒 |
RH血型C糖蛋白抗體 Anti-RHCG |
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GSTpiELISAKit |
絲氨酸消旋酶 Anti-Serine racemase |
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植物磷脂酶D（Phospholipase D）總活性比色法定量檢測試劑盒 |
大鼠果糖二磷酸醛縮酶A(ALDOA)elisa檢測試劑盒 |
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人高靈敏度促甲狀腺(U-TSH)elisa分析檢測試劑盒 |
4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞亞硝酸還原酶（NiR）測試盒 |
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酪蛋白激酶Ⅱβ亞基抗體 |
CULLIN抗體 |
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LY6G5B/C6orf19 |
C10orf46 |